幾丁質(zhì)酶測(cè)定測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100T/48S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨),以及類的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解,具有抵御侵染的作用,成為病害的研究熱點(diǎn)。
測(cè)定原理:
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖,進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物,在585nm處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。
備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(土壤樣品專用)和蒸餾水。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。
2.按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測(cè)。
3.培養(yǎng)液:直接測(cè)定。
